Quick Cell支原體基因組DNA提取試劑盒

產品描述

Quick Cell 支原體基因組 DNA 提取試劑盒專為高效提取支原體基因組DNA而設計，其操作流程和試劑配方均針對支原體的生物學特性進行了優化，適用于多種樣本類型，包括：細胞、細胞上清、血清、 血漿、全血、生物制品等。提取的 DNA 可直接用于 Quick Cell 系列支原體檢測試劑盒（恒溫快速法、PCR法、探針法）。其核心作用在于：去除樣品中潛在的 PCR 抑制劑或顯色干擾物，并濃縮支原體DNA，顯著提升檢測靈敏度達10-100倍。

訂購信息

產品組分

【注】：需自備的試劑和耗材：（1）無水乙醇，約 65 mL；（2）1.5 mL 離心管。

運輸與保存

常溫運輸。組分A在-20℃保存，其他室溫或4?C保存，有效期36個月。

使用方法

1.     實驗前準備

(1)  Wash Buffer GW1/GW2：第一次使用前，按標簽說明加入無水乙醇，并在瓶上做好標記。

(2)  Buffer GL：使用前檢查是否有結晶或沉淀。如有，請于 56?C 水浴溶解。

2.     樣本處理

(1)  待測樣品的選擇：本試劑盒優選體外培養的細胞上清（貼壁細胞直接取細胞培養上清）、血清、血漿、溶液型生物制品作為提取支原體基因組 DNA 的樣品。如果是粉末型樣品，需用水溶解后，再進行后續操作。

懸浮細胞： 可經 1200 rpm (約 150 g) 離心 5 min（【注】：離心力過大可能去除支原體），取上清。若細胞量少（< 500 萬個），也可直接取培養物。

抗凝全血： 可經 1200 rpm (約 150 g) 離心 5 min（【注】：離心力過大可能去除支原體），取血漿；或直接取 200 μL 全血。

非抗凝全血： 凝固后取血清。

(2)  取上述細胞上清、血清、血漿、生物制品等樣品 200 μL，用移液槍吹吸均勻后，進行后續操作。

3.     向以上溶液中加入 20 μL Proteinase K（20 mg/mL）溶液，混勻。

4.     加入 200 μL Buffer GL，混勻?！咀ⅰ浚翰灰獙?span> Proteinase K 和 Buffer GL 進行預混，否則 Proteinase K 可能失活。

5.     將離心管放置 56?C 水浴，孵育 15 min。

6.     （選做）加入 10 μL 支原體 qPCR 內參質粒 mycoIC2。【注1】：內參質粒 mycoIC2 只在本公司Quick Cell 探針法支原體檢測試劑盒內含有，如果使用其他支原體檢測方法，本步驟可以跳過！【注2】：加入的內參質粒 mycoIC2 用于監控支原體 DNA 的提取和后續支原體 qPCR 的擴增是否有效。

7.     加入 200 μL 無水乙醇，上下顛倒混勻數次。1000 rpm（約 100 g）低速短暫離心（20 Sec），使管壁和壁蓋上的液體集中到管底。

8.     將全部溶液加入到已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns DM）中。12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

9.     向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW1, 蓋上蓋子，快速顛倒一次（目的：清洗管壁和蓋子），12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

10. 向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW2，快速顛倒一次，12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

11. 再次清洗：向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2，蓋上蓋子，快速顛倒一次，12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

12. 繼續 12,000 rpm 離心 2 min。注：離心后，在亮光下檢查吸附膜上方塑料墊圈四周是否有液體殘留。如有殘留，將有殘留側置于離心力內側，12,000 rpm 再離心 1 min。

13. 棄收集管，將吸附柱置于新的 1.5 mL 離心管中。打開蓋子，50-65℃烘箱放置 ≥15 min（或 37℃培養箱/室溫放置 ≥30 min），確保乙醇揮發完（避免影響后續酶反應）。

14. 向吸附柱中間部位懸空加入50 μL Elution Buffer EB，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min，收集 DNA 溶液，-20℃保存。

【注1】：本 Elution Buffer EB 已優化，與本公司所有支原體檢測試劑盒兼容。使用其他品牌洗脫液時，加大 DNA 加樣量（如從 2 μL 增至 20 μL）可能影響擴增效率。

【注2】：如果樣品的初始體積分別是 200 μL、1 mL 或 5 mL，經最后 50 μL 洗脫，則支原體 DNA 分別大約濃縮了 4 倍、20 倍或 100 倍，支原體檢測的相對靈敏度也大約提高了 4 倍、20 倍或 100 倍。

注意事項

1.       本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.       必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購移液器、新開封的槍頭操作。整個操作過程，佩戴口罩，不要開口說話。

3.       如待測樣品是低溫保存的血漿、血清、臍帶血、胰酶、抗生素、未使用的培養液等，這類樣品中支原體含量較低，為了保證支原體DNA的檢出率，可通過離心濃縮提高樣品DNA濃度，再進行檢測。離心濃縮方法：取1 mL樣品于1.5 mL離心管中，13000 rpm（約16000 g）離心5min，棄去800 μL上清，剩余200 μL混勻。

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