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溶酶體染色試劑盒是一類熒光成像工具
2020-06-27 溶酶體染色試劑盒對于懸浮細胞，取10～60萬細胞，重懸于0.5mL細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅加入0.5mLJC-1染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20分鐘。在孵育期間，按照每1mLJC-1染色緩沖液（5×）加入4mL蒸餾水的比例，配制適量的JC-1染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。37℃孵育結(jié)束后，600g4℃離心3～4分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。溶酶體染色試劑盒是一類熒光成像工具，用來標記亞細胞，細胞器；例如細胞膜、溶酶體、...
細胞培養(yǎng)中馬血清的作用有哪些
2020-06-19 馬血清采自健康馬血液為原料，封閉系統(tǒng)內(nèi)無菌采血，微孔過濾而成，性狀為澄清液體，無噬菌體、超低內(nèi)毒素，無溶血無異物無細菌真菌支原體霉形體衣原體等，促細胞生長繁殖效果佳，適用于細胞、組織器官培養(yǎng)、細胞株保藏、單抗研制，是醫(yī)院、科研院校、動物疫苗、生物制藥廠家重要培養(yǎng)基之一。細胞在單純的培養(yǎng)基中不能存活，在特殊類型的細胞培養(yǎng)中必須提供某些營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子才能是細胞得以生長并維持生長狀態(tài)。基礎(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清，血清終濃度多為5－20％。特殊用途的血清來源需用經(jīng)驗確定。廣泛應(yīng)用的...
說一說胎牛血清在細胞培養(yǎng)研究中的重要作用
2020-05-18 胎牛血清采用心臟封閉穿刺的方法采自孕6～8月孕齡的健康母牛腹中的胎牛。通過生物材料合成吸附技術(shù)和低溫進行前期處理，去除細菌、病毒、支原體、抗體等影響血清質(zhì)量的因素，然后再在凈化車間中進行過濾分裝。胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。要說為什么很多細胞培養(yǎng)的科研人都用到胎牛血清，那就不得不說說胎牛血清那極為重要的作用。1.提供維持細...
ELISA常見的組織樣本制備方法
2020-05-15 為了保證ELISA實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。我們提倡新鮮樣品應(yīng)盡早檢測，對收集后一周內(nèi)檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆谩Ｈ缬刑厥庠蛐枰芷谛允占瘶颖荆谌〔暮笾v標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差，蛋白容易降解，直接影響實驗質(zhì)量，故應(yīng)避免反復(fù)凍融。不同的樣本請根據(jù)實際情況處理。樣品制備方法1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再...
血清中的沉淀物對細胞培養(yǎng)有什么影響？
2020-04-26 細胞生長，我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點。過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因為在血清生產(chǎn)時后已經(jīng)經(jīng)過100nm或者40nm的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴格的無菌檢測，因此不推薦再過濾用于細胞培養(yǎng)的血清。在實驗室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。污染，磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去...
外泌體在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用與研究
2020-04-16 外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體*于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運...
怎么處理牛血清白蛋白的常見問題
2020-03-25 牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過1h時，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因為在不含牛血清白蛋白的反應(yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...
蛋白酶K具有廣泛的底物特異性
2019-12-27 蛋白酶K具有廣泛的底物特異性。即便存在洗滌劑的情況下，其仍可降解許多非變性狀態(tài)的蛋白質(zhì)。蛋白酶K分離自一種可在角質(zhì)上生長的真菌白色側(cè)齒霉菌(Engyodontiumalbum)（前稱腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能夠降解非變性狀態(tài)的角質(zhì)（頭發(fā)），因而稱為“蛋白酶K”。1其切割的主要位點為帶有封閉氨基基團、鄰近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽鍵。因其廣泛的特異性，其較為常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相對分子量約為29.3kDa,是一種切割...

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